(一)基本构成冠达管理
Annexin V是一种钙离子依赖性磷脂结合蛋白,分子量约为35-36 kDa。其核心结构包含四个重复序列,形成特定构象以结合PS。
(二)标记物结构
通过化学偶联可形成多种标记物:
荧光标记:如Annexin V-FITC(荧光素标记,发射波长525 nm)、Annexin V-AF568(激发/发射波长578/603 nm)、Annexin V-AF594(激发/发射波长590/617 nm)、Annexin V-PE(藻红蛋白标记)。
生物素标记:Annexin V-Biotin,可通过链霉亲和素系统放大检测信号。
标记后保留对PS的结合能力,且荧光特性增强检测灵敏度。
功能
核心功能:磷脂酰丝氨酸(PS)结合
展开剩余77%在正常细胞中,PS位于细胞膜内侧;凋亡早期,PS外翻至细胞膜外侧,暴露于表面。
Annexin V通过钙依赖性机制高亲和力结合外翻的PS,成为凋亡细胞的标志。
特异性:仅标记早期凋亡细胞(膜完整),与坏死细胞(膜破裂)区分。
局限性
近年研究发现,Annexin V可能结合非凋亡细胞(如视网膜免疫细胞),影响其在特定组织中的凋亡检测准确性。
例如:冠达管理
在视网膜中,Annexin V标记部分髓系免疫细胞(如小胶质细胞),与凋亡细胞信号混淆
试剂信息
英文名称:AF546 Annexin V
中文名称:AF546 膜联蛋白 V
纯度:≥95%
储存条件:-20℃避光干燥
生产厂商:西安强化生物科技
&使用 Annexin V 检测凋亡的一般步骤使用AF546 Annexin V进行细胞凋亡检测(通常与PI或7-AAD等核酸染料配合使用)的一般流程如下:
(1)制备细胞悬液:收集处理组和对照组的细胞。对于贴壁细胞,需用不含EDTA的消化酶(如Accutase)进行温和消化,以保持细胞膜完整性并避免因螯合Ca²⁺而影响Annexin V结合。
(2)洗涤细胞:用预冷的PBS轻柔洗涤细胞1-2次,彻底去除培养液中的EDTA(如果使用了含EDTA的胰酶,更需充分洗涤)。
(3)重悬于结合缓冲液:用专用的1× Annexin V Binding Buffer重悬细胞,并调整细胞密度至合适浓度。
(4)孵育与染色:取100 μL细胞悬液,加入适量AF546 Annexin V和核酸染料(如PI)。轻柔涡旋混匀后,于室温避光孵育15-20分钟。
(5)上机检测:孵育后,向反应管中加入400 μL的1× Binding Buffer,混匀后尽快在1小时内上机检测。
&相关试剂Annexin V-Cy3标记
Annexin V-Cy5标记
Annexin V-Cy5.5标记
Annexin V-Cy7标记
Annexin V-AF350标记
Annexin V-AF488标记
Annexin V-AF594标记
Annexin V,PacBlue缀合物
Annexin V-生物素缀合物
Annexin V-iFluor 568 conjugate
Cell Meter Annexin V周亡检测试剂盒
西安强化生物科技有限公司xxn对以上内容进行了系统整理!
本试剂用于科研领域冠达管理,其他用途概不适用!
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